Какие техники применяются для секвенирования азотсодержащих нуклеиновых кислот?

Для секвенирования азотсодержащих нуклеиновых кислот (АНК) существуют различные методы. Вот некоторые из них:

1. Метод Сэнгера (дидеоксинуклеотидного секвенирования): Этот метод является основополагающим для секвенирования ДНК и РНК. В нем используются дидеоксинуклеотиды, которые прерывают длинацепочку при инкорпорации в растущую цепь ДНК или РНК. После фрагментации и разделения по размеру, секвенатор может считывать последовательность нуклеотидов на основе длины фрагментов.

2. Метод пирометрии (пиро-секвенирование): Этот метод основан на обнаружении пирофосфата, который выделяется в результате инкорпорации нуклеотидов в растущую цепь АНК. Пирофосфат затем преобразуется в световую вспышку, которая регистрируется и используется для определения последовательности нуклеотидов.

3. Метод ионного секвенирования: В этом методе используется технология полимера на основе иона, который пропускает нуклеотиды через поры в мембране. При прохождении через поры, нуклеотиды вызывают изменение тока, которое регистрируется и используется для определения последовательности нуклеотидов.

4. Метод секвенирования по синтезу (NGS): Этот метод позволяет параллельно секвенировать миллионы фрагментов АНК. В NGS используются различные технологии, такие как Illumina, Ion Torrent и другие. В основе этих технологий лежит синтез ДНК- или РНК-фрагментов в присутствии маркеров, которые позволяют идентифицировать каждый нуклеотид в последовательности.

Эти методы секвенирования АНК имеют разные преимущества и ограничения, и выбор конкретного метода зависит от целей и бюджета исследования. Современные технологии секвенирования значительно улучшили нашу способность анализировать и понимать геномы и транскриптомы различных организмов.